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研究蛋白质之间相互作用的实验方法有哪些?

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白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来,算是实验技巧分类目录的首篇。

一、酵母双杂交系统
酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道基因在酵母细胞内的表达,如果检测到报道基因的表达产物,则说明两者之间有相互作用,反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中,人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能,丰富了酵母双杂交系统的功能。此外,酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。

二、噬茵体展示技术
在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单**抗体的DNA序列,当噬菌体生长时,表面就表达出相应的单抗,再将噬菌体过柱,柱上若含目的蛋白,就会与相应抗体特异性结合,这被称为噬菌体展示技术。此技术也主要用于研究蛋白质之间的相互作用,不仅有高通量及简便的特点,还具有直接得到基因、高选择性的筛选复杂混合物、在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性等优点。目前,用优化的噬菌体展示技术,已经展示了人和鼠的两种特殊细胞系的cDNA文库,并分离出了人上皮生长因子信号传导途径中的信号分子。
三、等离子共振技术
表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance,SPR)已成为蛋白质相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一种纳米级的薄膜吸附上“诱饵蛋白”,当待测蛋白与诱饵蛋白结合后,薄膜的共振性质会发生改变,通过检测便可知这两种蛋白的结合情况。SPR技术的优点是不需标记物或染料,反应过程可实时监控。测定快速且安全,还可用于检测蛋白一核酸及其它生物大分子之间的相互作用。
四、荧光能量转移技术
荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究分子间的距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合,可定量获取有关生物**内蛋白质、脂类、DNA 和RNA 的时空信息。随着绿色荧光蛋白(GFP)的发展,FRET 荧光显微镜有可能实时测量**细胞内分子的动态性质。提出了一种定量测量FRET效率以及供体与受体间距离的简单方法,仅需使用一组滤光片和测量一个比值,利用供体和受体的发射谱消除光谱间的串扰。该方法简单快速,可实时定量测量FRET 的效率和供体与受体间的距离,尤其适用于基于GFP 的供体受体对。
五、抗体与蛋白质阵列技术
蛋白芯片技术的出现给蛋白质组学研究带来新的思路。蛋白质组学研究中一个主要的内容就是研究在不同生理状态下蛋白水平的量变,微型化,集成化,高通量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工具,他也是芯片中发展最快的芯片,而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯片有的已经在向临床应用上发展,比如肿瘤标志物抗体芯片等,还有很多已经应用再眼就的各个领域里。
六、免疫共沉淀技术
免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用[/url]的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金**葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA\|Pansobin”,因为SPA\|Pansobin比较大,这样复合物在离心时就被分离出来。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物四组分又被分开。然后经Western blotting法,用抗体检测目的蛋白是什么,是否为预测蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的,符合体内实际情况,得到的蛋白可信度高。但这种方法有两个**:一是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;二是必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。
七、pull-down技术
蛋白质相互作用的类型有牢固型相互作用和暂时型相互作用两种。牢固型相互作用以多亚基蛋白复合体常见,最好通过免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western法研究。Pull-down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外传路或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。

心理学家做的一个恋爱实验,一百个人每人背后贴上一到一百数字,男女两人互相结合,最后两人数字和为两人

由于大家都不知道自己背后的数字,因而首先大家会相互观察,很快分数高的男生和女生很快被大家找出来了。例如,99 号男生和100 号女生。大家都希望能和高分配对获得最大利益。尽管这些高分男女虽然不知道自己背后的数字,但看着周围的追求者人数自然明了,这个过程中他们也会变得异常挑剔,总希望寻找到更高分的。
配对过程中,屡遭碰壁的追求者迫于无奈只能退而求其次,原本目标是一定要找90+的人配对,慢慢的发现80+也可以了,甚至70+或者60+也凑合着过了。于是中游分数的人比较快地完成配对。
可那些个位数的人就比较悲催,追求过程中他们到处碰壁,到处被拒,被嫌弃,非常艰难地寻找愿意与自己配对的人。最后他们无外乎两种决策:一个是低分凑合,比如5 号和6 号,虽然奖金只有110 美元,也好过没有。二是和对方商量交易,按比例分奖金或事后另有报酬,其中不乏亏本交易,无论如何,好歹配对成功,否则实在没面子。眼看时间就要到了,还有少数人没有配对成功,没办法只能随便找一个草草完成任务,没有配对可是没有奖金。当然也有坚持不配对的,以单身结束实验的人。
实验结束,研究人员的结果是:绝大多数人的配对对象其背后的数字都非常接近自己的数字。比如55 号男生,他的对象有80%的可能性是50-60之间的女生,俩人数字相差20 以上的情况非常罕见。
可有趣的是,大家都很关心的100 号女生的配对对象竟然不是99 号男,也不是97 或95,竟然是73 号男生,两人相差了27!为什么会相差这么多?原来100 号女生被众多的追求者冲昏了头,她采取的策略是“捂盘惜售”,一直在等待更大数字的男人,等到大家都配对完毕,终于开始慌了,于是在剩下的男生里找了一个数字最大的,就是那位73 号幸运儿。她最后也尝试过去找90+的男生,但是配对成功都是有一定的感情,大多数人会采取保守的决策。
回顾这个恋爱匹配游戏的简化版,匹配关键在于你背后的数字,反映你的价值,分数高才会有更多的选择和主动权,也更有可能获得共同利益的最大化,因而最重要的攻略:努力提高自身价值!当然分数一定时,最终的规律其实是古人说的“门当户对”,分数的平衡保证关系的稳定,不可否认每个人标准都不同,但是社会中存在多数选择规律,背后数字都会有一个“社会分数”。玩家由于时间有限,范围限制,遍历的可能性较小。建议根据“麦穗理论”采取策略,例如有20个候选者,每个人都只有1/20的概率.可以将所有的追求者分组比如分5组,每组4人,首先从第一组中开始选择,在第一组中每一个男性都约会,但并不选择第一组中的男性,即使他再优秀、再完美都要选择放弃。因为,最合适的对象在第一组中存在的概率不过1/5。如果以后遇到比这组人更好的对象,就选他了。虽然最后选择的不一定是最好的,但应该会较为满意。在现实生活中,人们往往就是这么进行选择的,通过总结从前恋爱的经验与心得体会,作为评估后来者的基础。

可以告诉我十二星座的配偶?

白羊座:白羊座 配对指数 友情:★★★★★ 爱情:★★★★ 婚姻:★★★ 亲情:★★★★ 谈情必读: 两个一模一样的白羊座在一起,必然是**性的组合。 两人会很快被对方相同的行为态度吸引在一起。他们不会转弯抹角,而是直接表达出自己的爱意,马上进入热恋的阶段。不过他们过于相同的思想行为,相处久后会逐渐无法容忍对方的缺点,加上自私和不服输的性格,在没完没了的争吵中,对对方的爱意会变成讨厌甚至仇恨。另外,一旦两个人成为夫妻,一定要在理财计划上好好处理,否则入不敷出。 ***方面,充满活力的两人配合度相当高。只是太着重***而忽略心灵上的沟通也是他们之间的大问题。 白羊座:金牛座 配对指数 友情:★★ 爱情:★★★ 婚姻:★★ 亲情:★★ 谈情必读: 节奏不同是你们天生的问题,一个冲动,一个慢半拍,要把你们放在同一个世界一起生活,看来大家要非常容忍对方,如果不是,很难看到长远。 白羊座的人喜欢用强烈的追求攻势去攻陷金牛座的人的心,但金牛座固执求稳的性格,必然会深思熟虑才肯接受追求,中间拉拉扯扯的时候,可能白羊座已经忍不住转身就走。如果真是可以走在一起,大家不妨用双打网球的原理,一个补、一个攻,也许能够创出光明的前途,大前提当然是已经能理解和接受对方的特性。假如金牛座一方是男性,白羊座的女性就要更主动、加大追求力度。白羊座的人还要学习金牛座深思熟虑的处事态度,明白这点,大家都有好处的。 ***方面,金牛喜欢耳鬓撕磨,白羊则速战速决,有时候要学会迁就对方了。 白羊座:双子座 配对指数 友情:★★★★ 爱情:★★★★ 婚姻:★★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 默契的一对。 火象星座的白羊座加上风象星座的双子座,大家都是乐观一族,白羊座和双子座一起,热情总是一发不可收拾。由于生活的态度和方式很接近,多变的双子结合冲动的白羊更添趣味。这对组合,男双子女白羊会更合适。因为白羊没有双子刁钻的脑袋,如果是白羊座的男性遇上双子座的女性,你会被她搞得又爱又恨。一旦追到手了,白羊又要小心不可让自己的大男人**抬头,太过**她的话,她随时会有婚外情的。 ***方面,一个冲动一个贪新鲜,是对不错的组合哦。不过白羊有时候会怪双子不够投入。 白羊座:巨蟹座 配对指数 友情:★★ 爱情:★★★ 婚姻:★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 要长久相处,必须双方都付出努力,因为白羊座以自我为中心,对工作的观念重于家庭,恰巧和巨蟹座以家庭为中心的态度完全相反,他那种视家为酒店的生活方式,会令感情上极端敏感的巨蟹座更加不安、产生猜忌。 如果白羊座是男性,一定要有心理准备,巨蟹座的女性不喜欢把自己的情绪表现出来,但内心又认为自己的男友一定了解她的心情。在爱情世界中,她的付出要得到同等的回报,但她们又永远觉得不足够。如果是男性的巨蟹座,你必须给白羊座的女朋友觉得你有一些男子气慨,虽然你那种乐于照顾别人的个性,对方很受落,但长期相处你一定要给她一些实际的信心。 白羊座:狮子座 配对指数 友情:★★★★ 爱情:★★★★★ 婚姻:★★★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 两个差不多性格和看法的人走在一起,两“火”相遇,一见钟情,很快就能擦出爱的火花。恋爱的过程,节奏明快而且热烈,全世界的人都会感受到你们那种热情的爱。两人都喜欢追求物质上的满足,一起买名牌,去吃好东西,周游列国,一起参予****性的活动,默契十足。加上有广阔的生活社交圈,生活不会乏味。狮子座的霸气可以压住白羊座的横蛮,白羊座的女性会知道如何去扮成狮子座男朋友的崇拜者。 狮子座的女性则会知道如何讨白羊座的男朋友的欢心,偶然的小姐脾气也收放自如。 白羊座:**座 配对指数 友情:★★ 爱情:★★ 婚姻:★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 在星座学上来说,这两个是很难放在一起的星座,因为大家的基本态度完全不同,水火不容。 白羊座那一种冲动和工作狂,**座那一种挑剔、神经质放在一起会问题多多。首先**座不会喜欢白羊座的人生活圈子过份活跃,也接受不来那种“方便面”式的爱情态度,白羊座的人最初可能会被**座表现出来那一种细心所吸引,不过一相处下来,他会忍受不了**座那种原地慢步的缓跑式感情进度。也无法接受**座斤斤计较的个性。两个人决定要在一起,不是没可能,但要付出更多更多的爱!!! 白羊座:天秤座 配对指数 友情:★★★ 爱情:★★★★ 婚姻:★★★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 在星座学来说,白羊座和天秤座完全呈现180度对立,所有的东西几乎相反。但也由于这样,可以造就一对完美的关系,各自在对方身上找到自己所没有的东西,用对方的长处来弥补自己的缺点。自我意识强烈的白羊座可以从讲究合作关系和谐的天秤座身上学列如何和别人相处,天秤座也可挽回一点没性格的自我。而且白羊座会对天秤座安排的家庭感到很舒适,不会有压力,天秤座的人又会对白羊座可以懂得欣赏他们那种品味而高兴。 白羊座:天蝎座 配对指数 友情:★★ 爱情:★★ 婚姻:★★ 亲情:★★ 谈情必读: 要知什么叫做“火星撞地球”,必定要看这一对组合了,两个火爆型的人在一起要谈一次恋爱,的确需要大量“**”。而且天蝎座很多事都放在心上不表现出来,一旦有情变,他的报复性极强,达五星!!!白羊座很容易会被天蝎座的神秘魅力吸引,而将羊头撞过去,结果一撞出事,皆因两个人都是权力至上的人。试想如此情况之下,哪有可能不是由早吵到晚的一对? 不过在性方面大家都能充分享受到彼此提供的乐趣。 白羊座:射手座 配对指数 友情:★★★★★ 爱情:★★★★★ 婚姻:★★★★ 亲情:★★★★ 谈情必读: 大家都是属于火象星座,非常合拍的一对,往往会一见钟情一眼就被对方吸引住,继而开始恋爱。而且相处下来,越来越合拍。你们是热情无比的组合,在公众场合也会肆无忌惮地表现出来,真是好得让旁人嫉妒!一生中各自为自己所追求的幸福而努力,大家都给予对方适度的自由,不会太主观将自己的意愿加在伴侣身上,堪称天生一对。 白羊座:摩羯座 配对指数 友情:★★ 爱情:★★★ 婚姻:★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 一个节奏快,一个慢半拍,一个热情,一个冷淡,唯一共通点,就是大家都要争做主人,这个组合有点令人摇头,皆因大家实在太不同了,但认清了两方面的优缺点之后,如果能够好好掌握,不一定是坏事,起码白羊座可以在摩羯座身上找到他没有的稳固性和忍耐力,而摩羯座可以由白羊座身上学到乐观积极面对事情。只要大家愿意付出努力,不是凡事逼着对方依自己的方法来行事,是有机会维持下去的。 白羊座:水瓶座 配对指数 友情:★★★★ 爱情:★★★★ 婚姻:★★★ 亲情:★★★★ 谈情必读: 非常适合一起的一对组合,但可能要象****一样博一博。因为你俩的人生态度很接近,对任何事物都有象小孩子一般的热情和好奇,彼此很容日易沟通起来。要留意的就是白羊座的人缺乏耐性和持久力,而水瓶座的人变化多端,有时候连自己需要什么也不知道,两个人在一起,一定要找到解决这个问题的药方。 白羊座:双鱼座 配对指数 友情:★★ 爱情:★★ 婚姻:★★ 亲情:★★★ 谈情必读: 一个火,一个水,水火自古不相容,加上白羊是12星座的开始,双鱼则是12星座的结束,一头一尾很难接合,白羊座会被双鱼座那种消极而自我牺牲的人生观搞到不知如何是好,你们那一种乐观的思想满心以为能给他们正面的鼓励,但结果吃力不讨好,没被气昏就偷笑了!但是有时白羊又会被双鱼那种温柔而浪漫的情怀吸引住,非常矛盾。所以两个人要长久相处下去,必须要有改进才可。

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