今天鞋百科给各位分享细胞培养技术包括哪些步骤的知识，其中也会对有谁知道细胞培养的详细步骤啊(细胞培养具体步骤)进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在我们开始吧！

有谁知道细胞培养的详细步骤啊

这个问题问的太笼统，细胞培养是一门科学，不是单纯的几个步骤就可以解决问题的。你可以多收集点资料，慢慢积累。祝早日成功！

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

注意事项

（1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（2）细胞污染的预防

①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测*性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。

②操作过程防止污染。

③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。

④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。

⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。

⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。

⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。

⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。

⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。

⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液**头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（3）防止细胞交叉污染

①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。

②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液*头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。

③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。

扩展资料：

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞**技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物**技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模**。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是**技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的**。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

参考资料：百度百科：细胞培养

动物细胞培养的一般步骤是什么？

如何进行细胞培养

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞**技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物**技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模**。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是**技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的**。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

atcc c2c12细胞用什么培养基

ATCCCRL-1772 C2C12
基本信息
资源编号 ATCCCRL-1772
资源名称 C2C12
种属 Mus musculus, mouse muscle
类型 myoblast
形态 myoblast
提供形式 frozen
安全等级 1
应用领域 transfection host
培养方法
培养基 The base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbecco's
Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth
medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a
final concentration of 10%.
传代方法 Protocol: IMPORTANT - DO NOT ALLOW CULTURES TO BECOME CONFLUENT.
Cultures must not be allowed to become confluent as this will deplete the
myoblastic population in the culture. Myotube formation is enhanced when the
medium is supplemented with 10% horse serum instead of fetal bovine serum. 1.
Remove and discard culture medium. 2.Briefly rinse the cell layer with 0.25%
(w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum which
contains trypsin inhibitor. 3.Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to
flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is
dispersed (usually within 5 to 15 minutes). Note: To avoid clumping do not
agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to
detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate
dispersal. 4.Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium and aspirate cells by
gently pipetting. 5.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new
culture vessels. Inoculate at a cell concentration between 1.5 X 10 5 and 1.0 X
10 6 viable cells/75 cm2. Corning® T-75 flasks (catalog #430641) are recommended
for subculturing this product. 6. Incubate cultures at 37°C.
Medium Renewal:
Every two to three days
生长条件 Temperature: 37.0°C
生长特性 adherent
存储条件 liquid nitrogen vapor phase;Freeze medium: Complete growth medium
supplemented with 5% (v/v) DMSO
Storage temperature: liquid nitrogen vapor
phase
详细说明 （可见北纳生物）
描述 The C2C12 cell line differentiates rapidly, forming contractile
myotubes and producing characteristic muscle proteins.
Treatment with bone
morphogenic protein 2 (BMP-2) cause a shift in the differentiation pathway from
myoblastic to osteoblastic.
Tested and found negative for ectromelia virus
(mousepox).
Strain C3H
Derivation This is a subclone (produced by H. Blau, et al) of the mouse
myoblast cell line established by D. Yaffe and O. Saxel.

细胞的化合物有哪两种类型，分别包括哪

无机化合物和有机化合物
无机：水,无机盐
有机：糖,脂,蛋白,核酸

简述细胞培养过程中无菌操作的重要性及必要性

要做快只能靠你的熟练程度，但往往觉得自己很熟练的人会犯一些低级错误。无菌操作：1. 用紫外灯照射台子。2. 用的器材彻底灭菌包装好。3. 在酒精灯附近操作（不能太靠近）。4. 带一次性无菌手套，避免袖子或手上的细菌掉入培养基或细胞内 。

细胞传代培养的步骤

植物细胞与组织培养的基本过程包括哪些步骤

植物组织培养包括2个过程，脱分化和再分化。
1.外植体（被培养的组织块--叶片碎片、茎尖、幼胚等或细胞--去壁的叶肉细胞）细胞恢复**，形成大量的细胞--愈伤。这个过程是脱分化。由于是已经成熟的细胞脱离了成熟细胞的状态，回到类似胚胎阶段的状态，故称脱分化。
2.愈伤组织的细胞经过诱导，分化形成根、茎、叶等**甚至形成类似种子中的胚一样的结构--胚状体（体胚），这个过程就是再分化。