细胞冻存的步骤

1、在冻存细胞之前，应确保所有冻存管已经被正确标记，并且装有细胞的容器已经准备就绪。 **初步降温**：将装有细胞的冻存管放置在4℃的冰箱中，让细胞在这个温度下适应约40分钟。 **进一步降温**：随后，将冻存管移至-20℃的冰箱中，继续存放约30至60分钟。

2、从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。 记录复苏日期。

3、从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

4、您好，班德液氮罐为您答疑解惑：细胞的冻存和复苏一般是遵守“慢冻快融”。常规的慢冻方法是：先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。接着置于-20℃冰箱，约30～60min。置于-80℃超低温冰箱中放置过夜。置于液氮罐中长期保存。

5、将细胞冻存管取出，浸入37℃水浴锅内，轻轻晃动，注意融化，当融得只剩一个小冰块时，将细胞插入冰中。加入4℃预冷的培养基，用手指轻弹悬浮细胞团。250g离心10min，去除上清液，再加入培养基，轻轻悬浮。尽量将细胞中的DMSO洗去，计数。

求助:贴壁细胞的冻存和复苏的具体步骤

从-80℃或液氮中取出冻存的细胞，迅速入 37℃水浴，轻摇解冻。冻存管口保持在水面上，以免水浴锅中的水进入管中。 如果冻存细胞的地方离细胞房水浴锅较远，可以准备一个干净的烧杯，烧杯中装 37℃ 水，带着烧杯去取细胞以实现迅速入水浴，或者路上利用体温手搓冻存管到达水浴 时如未充分解冻再投入水浴继续解冻。

操作步骤 （一）冻存 消化细胞（同实验二），将细胞悬液收集至离心管中。1000rpm离心10分钟，弃上清液。沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。将悬液分至冻存管中，每管1 ml。将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。

细胞复苏 将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10mlDMEM培养基清洗，弃上清液。加入10mlDMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

细胞冻存的操作步骤?

1、从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。 记录复苏日期。

2、先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。接着置于-20℃冰箱，约30～60min。置于-80℃超低温冰箱中放置过夜。置于液氮罐中长期保存。

3、将细胞冻存管取出，浸入37℃水浴锅内，轻轻晃动，注意融化，当融得只剩一个小冰块时，将细胞插入冰中。加入4℃预冷的培养基，用手指轻弹悬浮细胞团。250g离心10min，去除上清液，再加入培养基，轻轻悬浮。尽量将细胞中的DMSO洗去，计数。

4、细胞冻存的具体过程：选择活力好，密度约80%的细胞，此时细胞处于对数生长期，比较适合冻存。细胞冻存依旧分为贴壁细胞冻存和悬浮细胞冻存。显微镜下观察细胞状态，若细胞密度较高，培养基变黄，需要换液4h之后再进行冻存操作，细胞长满后，将培养皿中的培养基用*小心的吸去。

5、细胞冻存的步骤如下： 配制含 10%DMSO、20%小牛血清的冻存培养液 4mL。 取出生长良好的细胞。 吸除旧的培养液：拿出吸管（要拿吸管的上端），插入与抽滤瓶相连的橡胶管 中，在酒精灯外焰灼烧灭菌，细胞培养瓶倾斜将吸管插入瓶底部一角，吸出旧的培 养液，将用后的吸管弃于废弃缸里。

动物细胞培养中细胞如何冻存?

1、一般采用细胞冻存，利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。

2、配制含10%DMSO或**、10～20%小牛血清的冻存培养液；取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

3、取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基**（或**），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。