今天鞋百科给各位分享色度分析使用步骤有哪些的知识,其中也会对废水的色度怎么测量的(废水色度的测定实验报告)进行解释,如果能碰巧解决你现在面临的问题,别忘了关注本站,现在我们开始吧!
废水的色度怎么测量的
所谓色度是指含在水中的溶解性的物质或胶状物质所呈现的类**乃至黄褐色的程度。溶液状态的物质所产生的颜色称为“真色”;由悬浮物质产生的颜色称为“假色”。测定前必须将水样中的悬浮物除去。通常测定清洁的天然水是用铂钴比色法。此法操作简便,色度稳定,标准色列如保存适宜,可长期使用。但其中氯铂酸钾太贵,大量使用很不经济。铬钴比色法,试剂便宜易得。方法精密度和准确度与铂钴比色法相同,只是标准色列保存时间较短。
1. 铂钴标准比色法
1.1 测定范围
本法最低检测色度为5度,测定范围5~50度。即使轻微的浑浊度也干扰测定,故浑浊水样需先离心使之清澈,然后取上清液测定。
1.2 方法提要
用氯铂酸钾和氯化钴配成与天然水黄**调相同的标准比色列,用于水样目视比色测定。规定每升水含有1mg铂和0.5mg钴所具有的颜色作为一个色度单位,称为1度。
1.3 试剂
1.3.1 铂钴标准溶液:称取1.246g氯铂酸钾(K2PtCl6)t 1.000g氯化钴(CoCl2•6H2O),溶于100mL纯水中,加入100mL**,用纯水定容至1000mL。此标准溶液的色度为500度。
1.4 仪器、设备
1.4.1 50mL成套高型具塞比色管。
1.4.2 离心机。
1.5 分析步骤
1.5.1 取50mL透明水样于比色管中。如水样浑浊应先进行离心,取上清液测定。如水样色度过高,可少取水样,加纯水稀释后比色,将结果乘以稀释倍数。
1.5.2 另取比色管11支,分别加入铂钴标准溶液0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00,3.50,4.00,4.50和5.00mL,加纯水至刻度,摇匀。配成的标准色列依次为0,5,10,15,20,25,30,35,40,45和50度。此标准色列可长期使用,但应防止此溶液蒸发及被玷污。
1.5.3 在光线充足处,将水样与标准色列并列,依白纸为衬底,使光线从底部向上透过比色管,自管口向下垂直观察比色。
1.5.4 记录相当标准管色度的度数。
1.6 计算
C=(m/V)×500.............................................(1)
式中: C——水样的色度,度;
m——铂钴标准溶液的用量,mL;
V——水样体积,mL。
2. 铬钴标准比色法
2.1 测定范围本法最低检测色度为5度,测定范围5~50度。即使轻微的浑浊度也干扰测定,故浑浊水样需先离心使之清澈,然后取上清液测定。
2.2 方法提要用重铬酸钾和硫酸钴配成与天然水黄**调相近的的标准色列,用于水样目视比色定量,色度单位与铂钴法相同。
2.3 试剂
2.3.1 稀**溶液:取1mL**(d20=1.19g/mL),加纯水至1000mL。
2.3.2 铬钴标准溶液(铬钴色度为500度):称取0.0437g重铬酸钾(K2Cr2O7)和1.00g干燥的硫酸钴(CoSO4•7H2O),溶于少量纯水中,加入0.50mL硫酸(d20=1.84g/mL),搅匀,用纯水定容至500mL。
2.4 仪器、设备
2.4.1 50mL成套高型具塞比色管。
2.4.2 离心机。
2.5 分析步骤
2.5.1 取50mL透明水样于比色管中。如水样浑浊应先进行离心,取上清液测定。如水样色度过高,可少取水样,加纯水稀释后比色,将结果乘以稀释倍数。
2.5.2 另取比色管11支,分别加入铬钴标准溶液(2.3.2)0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00,3.50,4.00,4.50和5.00mL,加纯水至刻度,摇匀。各管的铬钴色度依次为0,5,10,15,20,25,30,35,40,45和50度。
2.5.3 水样测定方法: 同1.5.3。
2.6 计算
C=(m/V)×500 ...........................(2)
式中: C——水样的色度,度;
m——铬钴标准溶液的用量,mL;
V——水样体积,mL。
废水的色度怎么测量的
所谓色度是指含在水中的溶解性的物质或胶状物质所呈现的类**乃至黄褐色的程度。溶液状态的物质所产生的颜色称为“真色”;由悬浮物质产生的颜色称为“假色”。测定前必须将水样中的悬浮物除去。通常测定清洁的天然水是用铂钴比色法。此法操作简便,色度稳定,标准色列如保存适宜,可长期使用。但其中氯铂酸钾太贵,大量使用很不经济。铬钴比色法,试剂便宜易得。方法精密度和准确度与铂钴比色法相同,只是标准色列保存时间较短。
1. 铂钴标准比色法
1.1 测定范围
本法最低检测色度为5度,测定范围5~50度。即使轻微的浑浊度也干扰测定,故浑浊水样需先离心使之清澈,然后取上清液测定。
1.2 方法提要
用氯铂酸钾和氯化钴配成与天然水黄**调相同的标准比色列,用于水样目视比色测定。规定每升水含有1mg铂和0.5mg钴所具有的颜色作为一个色度单位,称为1度。
1.3 试剂
1.3.1 铂钴标准溶液:称取1.246g氯铂酸钾(K2PtCl6)t 1.000g氯化钴(CoCl2•6H2O),溶于100mL纯水中,加入100mL**,用纯水定容至1000mL。此标准溶液的色度为500度。
1.4 仪器、设备
1.4.1 50mL成套高型具塞比色管。
1.4.2 离心机。
1.5 分析步骤
1.5.1 取50mL透明水样于比色管中。如水样浑浊应先进行离心,取上清液测定。如水样色度过高,可少取水样,加纯水稀释后比色,将结果乘以稀释倍数。
1.5.2 另取比色管11支,分别加入铂钴标准溶液0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00,3.50,4.00,4.50和5.00mL,加纯水至刻度,摇匀。配成的标准色列依次为0,5,10,15,20,25,30,35,40,45和50度。此标准色列可长期使用,但应防止此溶液蒸发及被玷污。
1.5.3 在光线充足处,将水样与标准色列并列,依白纸为衬底,使光线从底部向上透过比色管,自管口向下垂直观察比色。
1.5.4 记录相当标准管色度的度数。
1.6 计算
C=(m/V)×500.............................................(1)
式中: C——水样的色度,度;
m——铂钴标准溶液的用量,mL;
V——水样体积,mL。
2. 铬钴标准比色法
2.1 测定范围本法最低检测色度为5度,测定范围5~50度。即使轻微的浑浊度也干扰测定,故浑浊水样需先离心使之清澈,然后取上清液测定。
2.2 方法提要用重铬酸钾和硫酸钴配成与天然水黄**调相近的的标准色列,用于水样目视比色定量,色度单位与铂钴法相同。
2.3 试剂
2.3.1 稀**溶液:取1mL**(d20=1.19g/mL),加纯水至1000mL。
2.3.2 铬钴标准溶液(铬钴色度为500度):称取0.0437g重铬酸钾(K2Cr2O7)和1.00g干燥的硫酸钴(CoSO4•7H2O),溶于少量纯水中,加入0.50mL硫酸(d20=1.84g/mL),搅匀,用纯水定容至500mL。
2.4 仪器、设备
2.4.1 50mL成套高型具塞比色管。
2.4.2 离心机。
2.5 分析步骤
2.5.1 取50mL透明水样于比色管中。如水样浑浊应先进行离心,取上清液测定。如水样色度过高,可少取水样,加纯水稀释后比色,将结果乘以稀释倍数。
2.5.2 另取比色管11支,分别加入铬钴标准溶液(2.3.2)0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00,3.50,4.00,4.50和5.00mL,加纯水至刻度,摇匀。各管的铬钴色度依次为0,5,10,15,20,25,30,35,40,45和50度。
2.5.3 水样测定方法: 同1.5.3。
2.6 计算
C=(m/V)×500 ...........................(2)
式中: C——水样的色度,度;
m——铬钴标准溶液的用量,mL;
V——水样体积,mL。
请问谁知道气相色谱仪的使用步骤
气相色谱仪使用方法及实验操作步骤:
A、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关(或氮气钢瓶总阀),调整输出压力稳定在0.4Mpa左右(气体发生器一般在出厂时已调整好,不用再调整)。
B、打开色谱仪气体净化器的氮气开关转到“开”的位置。注意观察色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后,打开色谱仪的电源开关。
C、设置各工作部温度。TVOC分析的条件设置:(a)柱箱:柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终止温度250℃、终止时间10min;(b)进样器和***:都是250℃。脂肪酸分析时的色谱条件:(b)柱箱:柱箱初始温度140℃、初始时间5min、升温速率4℃/min、终止温度240℃、终止时间15min;(b)进样器温度是260℃,***温度是280℃。
D、点火:待***(按“显示、换档、***”可查看***温度)温度升到150℃以上后,打开净化器上的氢气、空气开关阀到“开”的位置。观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳定在0.1Mpa和0.15Mpa左右。按住点火开关(每次点火时间不能超过6~8秒钟)点火。同时用明亮的金属片靠近***出口,当火点着时在金属片上会看到有明显的水汽。如果在6~8秒时间内氢气没有被点燃,要松开点火开关,再重新点火。在点火操作的过程中,如果发现***出口内白色的聚四氟帽中有水凝结,可旋下***收集极帽,把水清理掉。在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法:观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。
E、打开电脑及工作站(通道一分析脂肪酸,通道二分析碘),打开一个方法文件:脂肪酸分析方法或碘分析方法。显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。接着可以转动色谱仪放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮,检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时,基线应随着变化)。待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮,进行色谱数据分析。分析结束时,点击“停止”按钮,数据即自动保存。
F、关机程序:首先关闭氢气和空气气源,使氢火焰***灭火。在氢火焰熄灭后再将柱箱的初始温度、***温度及进样器温度设置为室温(20-30℃),待温度降至设置温度后,关闭色谱仪电源。最后再关闭氮气。
液相色谱仪的使用步骤??
目的:制定规范的高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程。
范围:适用于Agilent 1260 HPLC。
责任:色谱检验工程师负责本规程执行。
内容:
1 开机
1.1 打开电脑。
1.2 打开液相色谱各个模块的电源。
1.3 双击桌面“仪器—联机”,进入联机界面。
1.4 排气:
1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)。
1.4.2 右键单击“泵”图标区域,选择“方法…”选项,进入泵编辑画面,设流速:5ml/min(一般为3-5ml/min),点击“确定”。
1.4.3 右键单击“泵” 图标,点击“控制…”选项,选中“ON”,点击“确定”,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,(一般为5分钟),切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。
1.4.4 右键单击“泵” 图标,点击“方法…”选项,设流速:0ml/min,手动旋紧冲洗阀。
1.4.5 右键单击“泵”图标,点击“方法…”选项,按照方法要求选择合适比例的流动相,设流速:1.0ml/min。
1.4.6 同理右键单击“柱温箱”,“***”图标,点击“方法…”选项,按照方法的要求设置温度,波长,点击“控制” 选项,“ON”打开柱温箱和***。
2 编辑方法
2.1 点击“方法”-“编辑完整方法”开始编辑完整方法。
2.2 选中除“数据分析 ”外的三项,进入下一选项卡。
2.3 方法信息:在“方法注释”中加入方法的信息(如:This is for test!)。进入下一选项卡。
2.4 泵参数设定:在“流速”处输入流量, 如1.0ml/min,停止时间:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间),按照要求选择合适比例的流动相配比,如**:水=75:25,A为水,B为**,则设置B:75%即可。进入下一选项卡。
2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置,进入下一选项卡。
2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。进入下一选项卡。
2.7 UV***参数设定: 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。
2.8 在“ 运行时选项表 ”中,选中“ 数据采集”,点击“确定”。
2.9 从“方法”菜单,选中“方法另存为…”,输入一方法名,如“测试”,点击“确定。
3 单次采集
3.1 从“运行控制”菜单中,选择“样品信息”选项,选择合适的路径,在“数据文件”中选择 “前缀/计数器”,输入样品瓶的位置,点击“确定”。
3.2
基线平稳后约10分钟,从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。
4 多次数据采集
4.1 按照步骤2 编辑完整方法。
4.2 点击“序列”-“序列表”,输入“样品瓶”“样品名称”,“进样次数”,选择合适的“做样方法”
4.3 点击“序列”-“序列参数”,选择序列数据的保存路径(序列会自动生成以“序列名称-时间”为名称的文件夹保存数据),数据建议以选择 “前缀/计数器”保存。
4.4 从“序列”菜单,选中“序列另存为…”,输入一序列名,如“测试”,点击“确定。
4.5 从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。
5 数据分析(脱机状态使用)
5.1 双击“仪器 —脱机”图标 进入的脱机画面。
5.2 从“视图”菜单中,点击“数据分析”进入数据分析画面。
5.3 从“文件”菜单选择“调用信号”,选中您的数据文件名。点击“ 确定”,则数据被调出。(如预建立标准曲线,应先打开浓度较低的标样图谱。)
5.4 做谱图优化:从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围” 中选择“满量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。点击“ 确定”。
6 积分:
6.1 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项,选择合适的“斜率灵敏度”,“峰宽”,“最小峰面积”,“最小峰高”。点击 ,自动加载积分参数。
6.2 点击左边“√”图标,将积分参数存入方法并退出“积分事件”。
6.3 如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。
7 标准曲线
7.1 点击“校正”-“校正设置”,输入“含量单位”。
7.2 点击“校正”-“新建校正表”,点击确定。输入“化合物名称”和“含量”,点击“确定”,按照提示删除其他组分。
7.3 至此完成单级校正,如要增加校正级别,应从“文件”菜单选择“调用信号”,选中您的数据文件名(第二个标样),点击“校正”-“添加级别”,点击确定,输入“含量”,依次增加校正级别。
8 打印报告
8.1 从“报告”菜单中选择“设定报告”选项,点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角,选中“外标法”,其它选项不变,点击“ 确定”。
8.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则点击“报告” 底部的“打印”钮。
8.3 点击“文件”-“另存为”-“方法”,把数据分析方法保存,下次分析可直接在“文件”-“调用”-“方法”下,将该方法调出使用。(调用的方法中含有积分方法,标准曲线方法和打印报告方法)
9 关机
9.1 关机前,先关紫外灯,用相应的溶剂(甲醇或**)充分冲洗系统大约30分钟。(色谱柱最终应保存在甲醇或**中)
9.2 退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机。
9.3
关闭Agilent 1260各模块电源开关。
10 其它注意事项
10.1
当样品运行时,切勿打开自动进样器前遮盖,否则进样过程停止。
10.2
系统发生漏液时,机器会检测到并停止进样,状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处,擦干漏液传感器,单击ON按钮,系统重新初始化。
10.3
注意紫外灯使用寿命,切勿来回开关紫外灯。
水的色度怎么测?有哪些方法
氯化钴的测试方法与标准
水的色度单位是度,即在每升溶液中含有2mg六水合氯化钴(Ⅱ)(相当于O.5mg钴)
和1mg铂(以六氯铂(Ⅳ)酸的形式)时产生的颜色为1度。
1.方法选择
测定较清洁的、带有黄**调的天然水和饮用水的色度,用铂钴标准比色法,以度数
表示结果。此法操作简单,标准色列的色度稳定,易保存。
对受工业废水污染的地表水和工业废水,可用文字描述颜色的种类和深浅程度,并以
稀释倍数法测定色的强度。
2.样品的采集与保存
要注意水样的代表性。所取水样应为无树叶、枯枝等漂浮杂物。将水样盛于清洁、无
色的玻璃瓶内,尽快测定。否则应在约4℃冷藏保存,48h内测定。
(一)铂钴标准比色法(A)
1。方法原理
用氯铂酸钾与氯化钴配成标准系列,与水样进行目视比色。
2.干扰及消除
如水样浑浊,则放置澄清,亦可用离心法或用孔径为0.45μm滤膜过滤以去除悬浮物。
但不能用滤纸过滤,因滤纸可吸附部分溶解于水的颜色。
3.仪器
50ml具塞比色管,其刻线高度应一致。
4.试剂
铂钴标准溶液:称取1.246g氯铂酸钾(K2PtCl6)(相当于500mg铂)及1.000g氯化钴
(CoCl2·6H20)(相当于250mg钴),溶于100ml水中,加100ml**,用水定容至1000ml。
此溶液色度为500度,保存在密塞玻璃瓶中,放于暗处。
5.步骤
(1)标准色列的配制
向50ml比色管中加入0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3..00、3.50、4.00、4.50、5.00、
6.00及7.00ml铂钴标准溶液,用水稀释至标线,混匀。各管的色度依次为0、5、10、15、
、20、25、30、35、40、45、50、60和70度。密塞保存。
(2)水样的测定
①分取50.0ml澄清透明水样于比色管中,如水样色度较大,可酌情少取水样,用水稀
释至50.0ml。
②将水样与标准色列进行目视比较。观测时,可将比色管置于白瓷板或白纸上,使光
线从管底部向上透过液柱,目光自管口垂直向下观察。记下与水样色度相同的铂钴标准色
列的色度。
6.计算
色度(度)=A×50/B
式中:A——稀释后水样相当于铂钴标准色列的色度;
B----水样的体积(m1)。
7.注意事项
(1)可用重铬酸钾代替氯铂酸钾配制标准色列。方法是:称取0.04.37g重铬酸钾和
1.000g硫酸钴(CoS04·7H20),溶于少量水中,加入0.50ml硫酸,用水稀释至500ml。
此溶液的色度为500度。不宜久存。
(2)如果样品中有泥土或其它分散很细的悬浮物,虽经预处理而得不到透明水样时,
则只测“表观颜色”。
(二)稀释倍数法(A)
1.方法原理
为说明工业废水的颜色种类,如:深蓝色、棕**、暗黑色等,可用文字描述。
为定量说明工业废水色度的大小,采用稀释倍数法表示色度。即,将工业废水按一定
的稀释倍数,用水稀释到接近无色时,记录稀释倍数,以此表示该水样的色度,单位为倍。
2.干扰及消除
如测定水样的“真实颜色”,应放置澄清取上清液,或用离心法去除悬浮物后测定;如
测定水样的“表观颜色”,待水样中的大颗粒悬浮物沉降后,取上清液测定。
3.仪器
50ml具塞比色管,其标线高度要一致。
4.步骤
(1)取100~150ml澄清水样置于烧杯中,以白色瓷板为背景,观测并描述其颜色种
类。
(2)分取澄清的水样,用水稀释成不同倍数。分取50ml分别置于50ml比色管中,
管底部衬一白瓷板,由上向下观察稀释后水样的颜色,并与蒸馏水相比较,直至刚好看不
出颜色,记录此时的稀释倍数。
(A)本方法与GB 11903—89等效
水的色度怎么测,有哪些方法?
水的色度单位是度,即在每升溶液中含有2mg六水合氯化钴(Ⅱ)(相当于O.5mg钴) 和1mg铂(以六氯铂(Ⅳ)酸的形式)时产生的颜色为1度。
方法选择 测定较清洁的、带有黄**调的天然水和饮用水的色度,用铂钴标准比色法,以度数 表示结果。此法操作简单,标准色列的色度稳定,易保存。 对受工业废水污染的地表水和工业废水,可用文字描述颜色的种类和深浅程度,并以 稀释倍数法测定色的强度。
样品的采集与保存 要注意水样的代表性。所取水样应为无树叶、枯枝等漂浮杂物。将水样盛于清洁、无 色的玻璃瓶内,尽快测定。否则应在约4℃冷藏保存,48h内测定。
色差仪的使用方法
色差仪,广泛应用于塑胶、印刷、油漆油墨、纺织、印染服装等行业的颜色管理领域,根据CIE色空间的Lab,Lch原理,测量显示出样品与被测样品的色差△E以及 △Lab值。适合企业内、外部色彩评价和数据管控。
请问谁知道气相色谱仪的使用步骤
气相色谱仪使用方法及实验操作步骤:
A、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关(或氮气钢瓶总阀),调整输出压力稳定在0.4Mpa左右(气体发生器一般在出厂时已调整好,不用再调整)。
B、打开色谱仪气体净化器的氮气开关转到“开”的位置。注意观察色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后,打开色谱仪的电源开关。
C、设置各工作部温度。TVOC分析的条件设置:(a)柱箱:柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终止温度250℃、终止时间10min;(b)进样器和***:都是250℃。脂肪酸分析时的色谱条件:(b)柱箱:柱箱初始温度140℃、初始时间5min、升温速率4℃/min、终止温度240℃、终止时间15min;(b)进样器温度是260℃,***温度是280℃。
D、点火:待***(按“显示、换档、***”可查看***温度)温度升到150℃以上后,打开净化器上的氢气、空气开关阀到“开”的位置。观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳定在0.1Mpa和0.15Mpa左右。按住点火开关(每次点火时间不能超过6~8秒钟)点火。同时用明亮的金属片靠近***出口,当火点着时在金属片上会看到有明显的水汽。如果在6~8秒时间内氢气没有被点燃,要松开点火开关,再重新点火。在点火操作的过程中,如果发现***出口内白色的聚四氟帽中有水凝结,可旋下***收集极帽,把水清理掉。在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法:观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。
E、打开电脑及工作站(通道一分析脂肪酸,通道二分析碘),打开一个方法文件:脂肪酸分析方法或碘分析方法。显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。接着可以转动色谱仪放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮,检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时,基线应随着变化)。待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮,进行色谱数据分析。分析结束时,点击“停止”按钮,数据即自动保存。
F、关机程序:首先关闭氢气和空气气源,使氢火焰***灭火。在氢火焰熄灭后再将柱箱的初始温度、***温度及进样器温度设置为室温(20-30℃),待温度降至设置温度后,关闭色谱仪电源。最后再关闭氮气。
液相色谱仪使用步骤
高效液相色谱仪的使用
1.色谱柱它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管,内径为4~5mm,长100~250mm。按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净,用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中,用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)为流动相测定柱效及分离度塔板数在2~3万/ml以上及分离度在1.5以上者,柱效好。为防止柱污染,常用1个 50mm长,4~5mm内径,装有硅胶(40-50mm)或立柱相同填料的保护柱(预柱)接在主柱之前,以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经,以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚,再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。
2.流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中,经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱,最后自***流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法(isocratic dlution),即自洗脱开始到结束,溶剂的配比恒定。另一类为梯度洗脱法(gradicnt clution),即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比,从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离,而整个色谱过程缩短。必须注意,梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中。
3.***适用于血药浓度的***有紫外线吸收,荧光发射和电化学三种。紫外***应用于对紫外光有吸收的药物,大多数药物分子对紫外光有吸收,故能较普遍采用,检测限有0.1μg左右。紫外***有固定波长型、可变波长型及扫描器,既能使流动相停流作组分的定性定量检测,又能提高测定灵敏度,重现性较好。荧光发射***对能产生荧光的药物才能使用。80年代应用激光替代氙灯光源,光强度增加了3~4倍,对某些药物的检测限可达pg级。电化学***是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池,在一暄电压下电解产生电流,放大后检测,检测限pg级。
4.数据处理现代高效液相色谱仪带有数据处理系统,除记录谱外,还能自动记录峰的保留时间,能自动积分求算峰面积,并能按照预定的程序作有关计算,报告分析结果。
高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法
1 液相色谱仪系统
液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱、柱温箱、***、数据处理系统组成(如图1所示)。对于整个系统而言,柱子、泵和***是核心部件,同时也是容易出事故的主要场所。
2 常见问题及解决方法
2.1 针对柱压问题(表1)
柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值,而是指压力波动范围在50PSI之间。压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题,但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动相种类相联系。值得注意的是在使用梯度洗脱时,进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。
在实际应用中柱压过高可从以下几个方面来考虑[1]。首先考虑柱子是否被堵,此时可更换一根新柱子进行检测。
2.2 针对保留时间漂移的问题 [2,3] (表2)
保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题,其包括了保留时间增大和减小。它的产生与很多原因有关。
2.3 针对异常色谱峰问题[2-4]
异常的色谱峰指的是色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。具体情况与原因分析如表3。
3 高效液相色谱仪的保养[5-7]
3.1 HPLC的日常操作条件
工作温度10~30℃; 相对湿度<80%; 最好是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。
3.2 泵的保养
使用流动相尽量要清洁;进液处的沙芯过滤头要经常清洗;流动相交换时要防止沉淀;避免泵内堵塞或有气泡。
3.3 进样器的保养
每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染。
3.4 柱的保养
柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;当柱子和色谱仪连接时,阀件或管路一定要清洗干净;要注意流动相的脱气; 避免使用高粘度的溶剂作为流动相;进样样品要提纯;严格控制进样量;每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭。
3.5 ***(UV)的保养
紫外灯的保养要在分析前、柱平衡得差不多时,打开***;在分析完成后,马上关闭***。同时样品池要保养。
4 结语
在高效液相色谱使用过程中故障排出时要遵守以下原则:一次只改变一个因素,从而确定假定因素与问题之间的联系;如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位,从而避免浪费;养成良好的记录习惯,一个良好的记录是成功地进行故障排除的关键。
总之,在使用高效液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养,仪器系统的干净是用好仪器和维护维修仪器的关键。
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高效液相色谱使用步骤
如何使用高效液相色谱(HPLC)