今天鞋百科给各位分享孢子悬液干什么用的知识，其中也会对如何制备单细胞悬液(如何制备单细胞悬液的原理)进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在我们开始吧！
如何制备单细胞悬液
先取一部分细胞组织，剪碎，加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶植物的话加入纤维素酶果胶酶然后装瓶。
微生物实验室建设中容易存在的问题有哪些？
1、微生物实验室因其具有生物危害性等原因，在对于实验人员的保护和防止样本的交叉感染方面提出了更多的特殊要求。
2、微生物实验室的特殊性，要求施工团队有丰富的经验，在不了解这些详细要求的情况下盲目施工，无形中对实验人员的人身安全及实验结果的准确定造成了较大隐患。
3、无菌室选用的材料不够合理，则无法达到密封性要求。
4、通风设计不合理，会危害人身健康。
以上为喜格-总结的微生物实验室建设中容易存在的几个问题。
中国药典微生物限度检查法的稀释液和培养基制备方法
稀释液配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。1 .pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液照无菌检查法（附录XII A）制备。2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液按缓冲液（二部附录XV D）配制后，过滤，分装，灭菌。如需要，可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。3.0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。 培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。1.营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基照无菌检查法（附录XII A）制备。2.玫瑰红钠琼脂培养基胨 5.0g玫瑰红钠 0.0133g葡萄糖 10.0g琼脂 14.0g磷酸二氢钾 1.0g水 1000ml硫酸镁 0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装．灭菌。3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD )胨 10.0g琼脂 14.0g酵母浸出粉 5.0g水 1000ml葡萄糖 20.0g除葡萄糖外，取上述成分．混合，微温溶解，滤过，加人葡萄糖，分装．灭菌。4．胆盐*糖培养基(BL ) 胨20.0g磷酸二氢钾 1.3g*糖 5.0g牛胆盐 2.0g氯化钠 5.0g（或去氧胆酸钠） ( 0.5g)磷酸氢二钾 4.0g水 1000ml除*糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2，煮沸，滤清，加人*糖、牛胆盐或去氧胆酸钠，分装，灭菌。5.*糖胆盐发酵培养基胨 20.0g0.04%溴甲酚紫指示液 25ml*糖 10.0g水 l000ml牛胆盐 5.0g除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2，加人0.04%溴甲酚紫指示液，根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。6．曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB )营养琼脂培养基 100ml曙红钠指示液 2ml20%*糖溶液 5ml亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。7.麦康凯琼脂培养基（MacC） 胨20.0g1%中性红指示液 3ml*糖 10.0g琼脂 14.0g牛胆盐 5.0g水 l000ml氯化钠 5.0g除*糖、1%中性红指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2 ±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。8.4 -甲基伞形酮葡糖昔酸（4-methylumbelliferyl-β-D-glucuionide，MUG）培养基胨 10.0g磷酸二氢钾（无水） 0.9g硫酸锰 0.5mg磷酸氢二钠（无水） 6.2g硫酸锌 0.5mg亚硫酸钠 40mg硫酸镁 0.1g去氧胆酸钠 1.0g氯化钠 5.0gMUG 75mg氯化钙 50mg水 l000ml除MUG外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加人MUG，溶解，每管分装5ml，灭菌。9.三糖铁琼脂培养基（TSI )胨 20.0g牛肉浸出粉 5.0g*糖 10.0g蔗糖 10.0g葡萄糖 1.0g氯化钠 5.0g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.2g0.2%酚磺酞指示液 12.5ml琼脂 12.0g水 1000ml除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层（2～75px）短斜面。10．四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）胨 5.0g硫代硫酸钠 30.0g牛胆盐 1.0g水 l000ml碳酸钙 10.0g取上述成分，混合，微温溶解，灭菌。临用前，取上述培养基，每10ml加入碘试液0.2ml和亮绿试液0.lml，混匀。11.沙门、志贺菌属琼脂培养基（SS）胨 5.0g硫代硫酸钠 8.5g牛肉浸出粉 5.0g中性红指示液 2.5ml*糖 10.0g亮绿试液 0.33ml牛胆盐 8.5g琼脂 16.0g枸橼酸钠 8.5g水 1000ml枸橼酸铁铵 1.0g除*糖、中性红指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。12．胆盐硫*琼脂培养基（DHL )胨 20.0g枸橼酸钠 1.0g牛肉浸出粉 3.0g枸橼酸铁铵 1.0g*糖 10.0g中性红指示液 3ml蔗糖 10.0g琼脂 16.0g去氧胆酸钠 1.0g水 l000ml硫代硫酸钠 2.3g除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加人其余成分，摇匀，冷至60 ℃，倾注平皿。13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基胨 10.0g溴化十六烷基三甲铵 0.3g牛肉浸出粉 3.0g琼脂 14.0g氯化钠 5.0g水 l000ml除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60 ℃，倾注平皿。14．亚碲酸盐肉汤培养基临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加人新配制的1%亚谛酸钠（钾）试液0.2ml，混匀，即得。15．卵黄氯化钠琼脂培养基胨 6.0g10%氯化钠卵黄液 100ml牛肉浸出粉 1.8g琼脂 14.0g氯化钠 30.0g水 650ml除10 %氯化钠卵黄液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.6土0 .1，灭菌，待冷至约60 ℃，以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液，充分振摇，倾注平皿。10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个，以无菌操作取出卵黄，放入10%无菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。16.甘露醇氯化钠琼脂培养基胨 10.0g酚磺酞指示液 2.5ml牛肉浸出粉 1.0g琼脂 14.0g甘露醇 10.0g水 l000ml氯化钠 75.0g除甘露醇、酚磺酞指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节州值使灭菌后为7.4 ±0.2，加入琼脂，加热溶化后，滤过，分装，灭菌，冷至60 ℃，倾注平皿。17．*糖发酵培养基胨 20.0g*糖 10.0g0.04%溴甲酚紫指示液 25ml水 l000ml除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入指示液，分装于含倒管的小试管中，每管3ml．灭菌。18．绿脓菌素（Pyocyanin）测定用培养基（PDP琼脂培养基）胨 20.0g** l0ml氯化镁（无水） 1.4g琼脂 14.0g硫酸钾（无水） 10.0g水 1000ml取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入**及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。19.梭菌增菌培养基牛肉浸出粉 10.0g**半胱氨酸 0.5g胨 10.0g氯化钠 5.0g酵母浸出粉 3.0g醋酸钠 3.0g可溶性淀粉 1.0g琼脂 0.5g葡萄糖 5.0g水 1000ml取上述成分，混合，加热煮沸使溶解，调节pH值使灭菌后为6.8士0.2，加热溶化，滤过，分装，灭菌。20.哥伦比亚琼脂培养基酪蛋白胰酶消化物 10.0g肉胃酶消化物 5.0g心胰酶消化物 3.0g酵母浸出粉 5.0g玉米淀粉 1.0g氯化钠 5.0g琼脂 15.0g水 1000ml除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3士0.2，加入琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至45～50 ℃，加人相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾注平皿。21．沙氏葡萄糖液体培养基胨 10g葡萄糖 40g水 1000ml除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过。加人葡萄糖，溶解，分装，灭菌。22．沙氏葡萄糖琼脂培养基胨 10g水 1000ml葡萄糖 40g琼脂 14g除琼脂和葡萄糖外，混合，微温溶解，滤过。加入琼脂和葡萄糖，溶解，分装，灭菌。23.（科玛嘉）念珠菌显色培养基（注1）胨 10.2g琼脂 15g氢罂素 0.5g灭菌水 1000ml色素 22.0g除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值至6.3士0.2。滤过，加入琼脂，加热煮沸，不断搅拌至琼脂完全溶解，倾注平皿。24.1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基**玉米粉 40g琼脂 10～15g聚山梨酯80 10ml水 1000ml取玉米粉、聚山梨酯80及蒸馏水500ml，混合，65℃加热30分钟，混匀，用纱布滤过，补足原水量。取琼脂，水500ml，混合，加热溶解。将以上两种溶液混合，摇匀，分装，灭菌。
吐温20与吐温80做孢子悬液有什么区别，各一般用量是多少？
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微生物菌种保藏的方法有哪些？
菌种的优劣是食用菌生产成败的关键。菌种是国家重要的生物资源，也是微生物工厂首要的生产资料。由于微生物繁殖快、易变异，因此微生物菌种特别需要妥善保藏。世界各国对微生物菌种都很重视。中国科学院微生物研究所专门设立了菌种的保藏机构，为各生产单位收藏和供应各种优良菌种。当然就具体的生产单位而言，大量的生产用菌种还得靠自己来生产和保藏。
菌种保藏的目的：是使优良菌种经过较长时间后，仍能保持菌种的优良性状、生活能力及纯度，降低菌种的衰亡速度，确保菌种的纯一，防止杂菌污染及绝种。
保藏菌种的方法：人们在长期的生产实践中，积累了不少保藏菌种的经验，常用的保藏方法有：斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、砂土管保藏法、滤纸片保藏法、谷粒保藏法等。常用保藏菌种的方法有以下几种：
（1）斜面低温保藏法这是最简单最普通的保藏方法。首先将菌种在适宜的斜面培养基（一般PDA）上培养成熟后，选择菌丝生长粗壮，边缘保存。一般保存温度4～6℃，除草菇和银耳菌种外（10～15℃），此方法对其他食用菌都适宜，一般菌种可保藏2～4个月，所以需定时移接。此法保藏虽然方便，但是保藏时间短，需经常转管，也很容易发生衰退变异现象。因此，不能用作长期保藏，最好与其他方法结合起来保藏。
另外，为了减少保藏期间培养基水分蒸发，琼脂最好加到2.5%。为防止菌种在保藏过程中产酸分的积累，应加入0.2%的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等缓冲盐类，同时，培养成熟后，最好将棉塞管口外剪平，并用矿蜡封或换以无菌木塞，这样做也可以减少培养基水分的散失，延长保存时间。
在农村如果没有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌种换上无菌橡皮塞，并用矿烛蜡封后密闭的广口瓶中，悬入井底保藏。（2）贮藏室保藏法原种和栽培种一般只在贮藏室短期保藏，贮藏室温度0～10℃为好。室内应清洁、干燥、无光，应经常检查温度和湿度，以降低其生活力，减少变异退化，防止杂菌污染，避免过早出菇。温度越高，保存的时间越短。
真菌如何保藏`~~~~~
保存方法:
（1）室温保存
（2）低温保存
（3）矿物油下保存
（4）土壤中保存
（5）干燥保存
（6）冷冻干燥保存
（7）灭菌蒸馏水中保存
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种：
1．传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2．液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3．载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4．寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如**、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。**等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5．冷冻保藏法
可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6．冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛*、血清、糖类、**、二甲**等。
三、器材
细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；
肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛*，灭菌水，化学纯的液体石蜡，**，五**二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％**，无水氯化钙；
灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与 100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
四、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点
下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。
1．斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。
保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。
此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。
2．液体石蜡保藏法
（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。
（2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。
（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准（图Ⅶ-12），使菌种与空气隔绝。
（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。
此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏3个月之久。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。
3．滤纸保藏法
（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟。
（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。
（3）取灭菌脱脂牛*1—2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛*内混匀，制成浓悬液。
（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
（5）将安瓿管放入内有五**二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。
（6）将棉花塞入管内，用火焰按图Ⅶ-13熔封，保存于低温下。
（7）需要使用菌种，**培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
4．沙土保藏法
（1）取河沙加入10％稀**，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。
（2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。
（3）烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。
（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
（5）烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。
（6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。
（7）抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
（8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。
（9）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。
（10）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。
（11）每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。
（12）若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。
（13）需要使用菌种，**培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。
此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，但应用于营养细胞效果不佳。
5．液氮冷冻保藏法
（1）准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1．2mm液体的。
（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的**蒸馏水溶液或10％二甲**蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用1．05kg/cm2>，121．3℃ 灭菌15分钟。
（3）接入菌种将菌种用10％的**蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。
（4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
（5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器（图Ⅶ-14）的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。
（6）恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。
此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。
6．冷冻干燥保藏法
（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管（图Ⅶ-15），大小要求外径6— 7．5mm，长105mm，球部直径9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2>， 121．3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7—10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛*2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0．2ml。
（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2>）酒**或干冰**液，温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。
（5）真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。装置仪器如图Ⅶ-16，安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。
抽气一般若在30分钟内能达到93．3Pa（0．7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到**燥物已趋干燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg），保持压力6—8小时即可。
（6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管（图Ⅶ-17）继续抽气，约10分钟即可达到26．7Pa（0．2mmHg）。于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈**进行封口。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。
此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年，但设备和操作都比较复杂。